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技術(shù)文章
非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒備案-風(fēng)途為您供應(yīng)非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒（FT-FWSJ）。非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒 為認(rèn)定的非洲豬瘟檢測(cè)試劑。
近日,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布第254號(hào)公告,公告顯示,中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、北京維德維康生物技術(shù)有限公司、北京明日達(dá)科技發(fā)展有限責(zé)任公司研制的非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒和鄭州中道生物技術(shù)有限公司、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所、廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所、武漢華騰濟(jì)康生物科技有限公司、申聯(lián)生物醫(yī)藥(上海)股份有限公司、深圳市康百得生物科技有限公司研制的非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒符合獸藥產(chǎn)品要求,獲得農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)。風(fēng)途為您提供的就是鄭州中島生物技術(shù)有限公司的產(chǎn)品。
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒（PCR熒光探針?lè)ǎ?/span>
英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）
［預(yù)期用途］
本試劑盒主要用于檢測(cè)疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV, African Swine Fever
Virus）核酸，適用于非洲豬瘟病毒的檢測(cè)、輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
【試劑盒組分】
1、試劑盒組成及貯藏條件
名稱 | 50 T | 貯藏條件 |
1、反應(yīng)液A | ImL | -20°C |
2、反應(yīng)液B | ImL | |
3、陽(yáng)性對(duì)照 | 250μL | |
4、陰性對(duì)照 | 250μL | |
5、PCR反應(yīng)液 | 850μL | |
6、酶混合液 | 150μL |
2、需自備材料：生理鹽水、無(wú)菌槍頭、熒光PCR反應(yīng)管、記號(hào)筆等。
【操作步驟】
一、樣品制備
1、 血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為EDTA）或血清樣品，編號(hào)備用。
2、 組織樣品：采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大?。劭萍艏羲橛诮M織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘，取上清液于滅菌離心管中，編號(hào)備用。
二、DNA提取
取反應(yīng)液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫（20°C左右）靜置3分鐘，加入反應(yīng)液B 20μL,吹打混勻即可，若為抗凝全血，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液。
二、PCR擴(kuò)增
1、配液：取出PCR反應(yīng)液、酶混合液，在室溫*融化后，充分混勻，瞬離，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應(yīng)液中，充分混勻，瞬離后按每份20μL分裝使用；或按照每份PCR反應(yīng)液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗(yàn)用量，混合兩種反應(yīng)液,瞬離后按照每份20μL分裝到熒光PCR 反應(yīng)管中，剩余試劑立即凍存；（操作過(guò)程要注意避光）
2、加樣擴(kuò)增：分別向上述PCR反應(yīng)管中加入5μL樣本 DNA或陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照，混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序：
步驟 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
UNG處理 | 50°C： 2分鐘 | 1 |
預(yù)變性 | 95°C： 3分鐘 | 1 |
預(yù)擴(kuò)増 | 95°C： 8 秒 55C： 8 秒 | 5 |
PCR擴(kuò)增 | 95°C： 8 秒 55°C： 8 秒 | 40 |
熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個(gè)循壞的55°C時(shí)收集熒光信號(hào)。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL,同時(shí)要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式。
(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說(shuō)明書(shū)中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時(shí)間短無(wú)法運(yùn)行,可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95°C： 5秒 55°C：30秒。)
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